艾滋病病毒(HIV)病毒载量通过检测HIV在人体血浆中的病毒核酸含量获得，一直作为HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人的随访指标，判断病人的治疗效果以及传播风险，从《全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)》将HIV核酸试验作为检测策略的补充试验后，HIV病毒载量开始作为HIV重要的辅助诊断方法。
在2017年中国疾病预防控制中心段星等对云南德宏地区做过相关调查研究也得出了核酸定量检测>5 000拷贝/mL可用于HIV的诊断结论。行标《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断(WS 293-2019)》(简称《行标》)正式将HIV病毒载量检测纳入HIV感染的诊断方法之一，该《行标》于2019年7月1日正式实行，为更好推行新《行标》，本研究对比HIV抗体确证结果与病毒载量结果，探讨HIV病毒载量用于HIV感染诊断在实际应用中的可靠性、优势、可能遇到的问题以及解决方法。
1.材料与方法
1.1
样本来源
2019年HIV抗体筛查阳性的待确证标本，需符合首次HIV抗体确证检测且未使用相关抗病毒治疗药物。
1.2
方法
根据相关省份免费救治政策，收集每位HIV抗体待确证者1管血清、2管血浆和1管全血分别用于抗体确证、病毒载量和CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数检测。以HIV抗体确证结果作为HIV感染判定标准，HIV抗体检测策略与程序按照《全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)》执行。
确证检测：蛋白印迹试验(WB)，试剂：新加坡MP公司生产的HIV-1+2抗体蛋白免疫印迹试剂。按照试剂盒说明书步骤操作，按说明书判读标准进行结果的判读，两条env带加其他任何一条带判断HIV-1抗体阳性;无特异性条带，判HIV抗体阴性;有条带但数量未达到试剂盒阳性评定标准，判为HIV抗体不确定，HIV抗体不确定者2~4周后随访复检，根据最终随访的抗体确证结果判断HIV感染状态。
病毒载量检测：
仪器：COBASTaqMan96分析仪;
试剂：Roche公司的COBASTaqManHIV-1Test;
按照试剂盒说明书步骤操作，高于检测线报告检测值，最低检出线20拷贝/mL，低于检测线即报告“TND”。对于病毒载量≤5 000拷贝/mL的样本重新采样检测。
CD4细胞计数检测：
仪器：BDcalibur;
试剂：CD4/CD8/CD3抗体三色试剂，按照试剂盒说明书步骤操作，按实际检测值报告结果。
1.3
数据统计法
用SPSS 22.0软件处理数据，皮尔森χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
共收集到标本合计450例，剔除既往确证及已进行抗病毒治疗病例8例，符合要求标本442例，其中确证为HIV抗体阳性标本275例，HIV抗体阴性标本167例。275例HIV抗体阳性样本病毒载量：>5 000拷贝/mL的272例;≤5 000拷贝/mL 3例，分别为940拷贝/mL、2 800拷贝/mL和2 070拷贝/mL。167例HIV抗体阴性样本中病毒载量均为低于检测线。详见表1。
本研究中按照艾滋病分期标准以CD4细胞数200个/µL和500个/µL作为分界点，样本中CD4细胞数>500个/µL、200~500个/µL之间和<200个/µL的HIV-1抗体阳性率分别为6.6%、85.3%和94.5%，CD4细胞数与HIV病毒载量呈负相关。
442例样本中有154例标本初次确证为HIV抗体不确定，经2~4周的随访，确证检测诊断HIV抗体阳性37例，HIV抗体阴性117例。确证带型组合所占比率和阳转率分别为gp160/gp160+p17带型45.0%和10.1%;p24/p24+p17带型占26.0%和5.0%;包含p24、gp160带型占20.0%和77.4%;含两条或三条env带占3.0%和100%;其他带型占6.0%和0。
HIV抗体确证阳性结果与病毒载量、CD4细胞数及窗口期的抗体带型等特征均有显著相关性(表2)。
3.讨论
基于《行标》中新增“核酸定量(病毒载量)试验>5 000拷贝/mL提示HIV感染，阴性不能排除HIV感染，当样本检测值≤5 000拷贝/mL，报告检测值，结合临床及流行病史、CD4细胞检测值或者HIV-1抗体随访检测结果等进行诊断”。
本研究中442例标本病毒载量结果与HIV抗体确证结果一致性很好，272例标本病毒载量>5 000拷贝/mL均为HIV抗体确证阳性，按照诊断标准这两种诊断结果完全一致，病毒载量的阳性预测值100%。
将病毒载量≤5 000拷贝/mL的样本按《行标》要求均进行了重新采样复检，前后两次结果相差都在一个数量级以内，结果一致。病毒载量≤5 000拷贝/mL的高于检测线的样本，在本研究中HIV抗体阳性预测值也达到100%，但是由于病毒载量低的样本易受到很多因素干扰，根据《行标》不能诊断为HIV感染，因此需要综合判断且以HIV抗体确证结果为参考。
本研究中首次确证为HIV抗体不确定者，在2~4周对其进行了随访，发现病毒载量值TND，HIV抗体均为阴性，载量值>5 000拷贝/mL，HIV抗体均为阳性，可见病毒载量检测大大缩短了HIV抗体检测的窗口期，因为感染早期病毒在体内大量复制，而抗体还未完全产生，所以病毒载量是早期HIV感染诊断首选方法。
同时对HIV抗体不确定结果的确证条带进行了分析：本研究抗体不确定样本带型中gp160/gp160+p17、包含p24、gp160、p24/p24+p17几种组合带型HIV抗体阳转率相似，阳转率20%左右。
含两条或三条env阳转率达100%，出现这些带型建议及时做核酸检测或密切追踪随访，尤其是含两条或三条env带需高度警惕，而除此以外的其他带型阳转率极低。国内也有类似研究。因此，HIV抗体窗口期出现阳转率高的确证带型提示尽早使用病毒载量检测，缩短窗口期，早期诊断、早治疗、早干预，减少失访率，减少病毒传播。
HIV主要侵犯的是CD4细胞导致细胞的破坏，从而导致免疫细胞数量下降，在HIV感染后，通过CD4细胞可以了解患者的免疫状况，研究中对所有样本均进行了CD4细胞计数检测，CD4细胞数<500个/µL的HIV阳性预测值显著升高，且发现CD4细胞数和病毒载量呈现负相关，与相关文献中指出的CD4细胞数与艾滋病感染免疫相关性一致，对于部分HIV晚期感染者由于免疫缺陷造成抗体确证条带少，CD4细胞数低，这时提示采用病毒载量检测是HIV感染诊断最有效的方法。因此CD4细胞计数可以作为HIV感染诊断重要的参考指标。
病毒载量检测具有敏感性和特异性高特点，尤其在感染早期和艾滋病终末期比HIV抗体确证检测更具优势。但病毒载量检测敏感性高，易出现污染，使用这种方法诊断时务必谨慎，做到实验前、中、后严格质量控制，对于≤5 000拷贝/mL的病毒载量需要综合判断。病毒载量检测作为新的HIV感染诊断方法，将与HIV抗体确证检测方法互为补充，合理使用这两种方法并结合CD4细胞检测将更精准、高效诊断HIV感染。